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tunel试剂盒的简单介绍

   日期:2023-04-24     浏览:48    评论:0    
核心提示:有无好用的TUNEL细胞凋亡分析试剂盒推荐?细胞凋亡中,染色体DNA双链断裂或单链断裂而产生大量的粘性3'-OH末端,可在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT)的作用下,将脱氧核糖核苷酸和荧光素、过氧化物

有无好用的TUNEL细胞凋亡分析试剂盒推荐?

细胞凋亡中,

染色体DNA双链断裂或单链断裂而产生大量的粘性3'-OH末端,可在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT)的作用下,将脱氧核糖核苷酸和荧光素、过氧化物酶、碱性磷酸酶或生物素形成的衍生物标记到DNA的3'-末端,从而可进行凋亡细胞的检测,这类方法称为脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(terminal

-deoxynucleotidyl

transferase

mediated

nick

end

labeling,

TUNEL)。

由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA的断裂,因而没有3'-OH形成,很少能够被染色。由此,TUNEL成为了检测DNA片段化(细胞凋亡)的最常用方法。

A***kine

TUNEL法细胞凋亡检测试剂盒

(橙红荧光)

利用脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT)将脱氧核糖核苷酸-荧光素偶联物标记到DNA缺口的3'-末端。试剂盒提供实验所需的全套试剂组分以及优化的实验方案,检测方便,且适用于荧光酶标仪、荧光显微镜、流式细胞仪。荧光信号易于被检测(Ex/Em

=

555nm/565

nm)。

细胞凋亡分析试剂盒特点:

1.独家优化的实验方案,分别适用于荧光酶标仪、荧光显微镜、流式细胞仪。

2.通用的荧光检测参数(Ex/Em

=

555nm/565

nm),检测方便。

tunel染色红色和绿色的区别

TUNEL(TdT-mediated dUTP nick end labeling)细胞凋亡检测试剂盒是用来检测组织细胞在凋亡早期过程中细胞核DNA的断裂情况。

其原理是荧光素(fluorescein)标记的dUTP在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT Enzyme)的作用下,可以连接到凋亡细胞中断裂DNA的3’-OH末端,并与连接辣根过氧化酶(HRP,horse-radish peroxidase)的荧光素抗体特异性结合,后者又与HRP底物二氨基联苯胺(DAB)反应产生很强的颜色反应(呈深棕色),特异准确地定位正在凋亡的细胞,因而在光学显微镜下即可观察凋亡细胞;由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA断裂,因而没有3‘-OH形成,很少能够被染色。

本试剂盒适用于组织样本(石蜡包埋、冰冻和超薄切片)和细胞样本(细胞涂片)在单细胞水平上的凋亡原位检测。还可应用于抗肿瘤药的药效评价,以及通过双色法确定细胞死亡类型和分化阶段

tunel 试剂盒细胞与组织切片的有区别吗

TUNEL法可以通过原位标记DNA断裂端从而标记凋亡细胞,因此特别适用于组织凋亡研究,是目前研究组织体内细胞凋亡最广泛采 用的手段。同时由于其原理是基于检测早期基因组的断裂,因此可以检测到很早期的细胞凋亡,且能通过标记的多少,进行半定量研究。

TUNEL的缺点是:

1),操作要求高,组织样本需要固定(即使是培养细胞,也需要固定),不恰当的固定方法对实验结果影响很大,导致背景过高或者信号过弱,因此实验结果重复性不好; 有的人花上半年做一个体内的TUNEL是一点都不奇怪的。

2),大部分诱导凋亡的药物也引起DNA损伤,从而产生DNA断裂,易引入假阳性;

3)凋亡晚期细胞基因组大量降解,导致TUNEL标记反而减少,因此此法反应的是早期凋亡比例,不能严格反应凋亡比例,属于半定量研究。

尽管有如此多缺点,但由于其是目前为数不多的能原位标记凋亡细胞的方法,因此用于组织体内凋亡研究仍然是首选。但体外细胞实验研究,很少用此法。

凋亡检测中,TUNEL并不是过时的方法,现在研究凋亡的文献仍然常见。而且相反,还比以前多一点,因为现在体内实验越来越多了,甚至线虫的凋亡研究,都用TUNEL。

凋亡研究中,的确有几种方法过时了,当然是因为有替代方案了,比如DNA ladder,电镜。

至于Annexin V是不能用来和TUNEL一起评论的,前者用于细胞,而且主要是悬浮细胞,后者主要用于组织。虽然有人也做镜下的Annexin V观察,TUNEL的细胞staining,但这都不是主流。

回到lz的原帖,的确如大家所言,做贴壁细胞,不推荐用TUNEL。如果是经典凋亡途径,只是确定比例,用最经典,最常用的subG1法即可,如果是不确定是否是凋亡,用Annexin V,不过贴壁细胞用此法,要注意消化时间。

TUNEL法检测细胞凋亡实验原理和方法谁能提供一下!

原理 在细胞凋亡的过程中,基因组DNA会断裂产生双链、低分子量的DNA片段和高分子量的DNA片段,这些DNA链的缺口可以利用没标记法来识别。试剂盒就是通过催化DNA断端,来标记缺口。酶底物显色后,可以光镜检查被染色的细胞。

方法 TUNEL 试剂盒

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标签: 细胞 凋亡 标记
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